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高效液相色譜儀的組成部分及各部分的作用

  • 發(fā)布日期:2023-06-01      瀏覽次數:3660
    •    高效液相色譜儀器的結構:
        1.進(jìn)樣系統:一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作,進(jìn)樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復性是有益的。
        2.輸液系統:該系統包括高壓泵、流動(dòng)相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強,流速可調且穩定,當高壓流動(dòng)相通過(guò)層析柱時(shí),可降低樣品在柱中的擴散效應,可加快其在柱中的移動(dòng)速度,這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動(dòng)相貯存錯和梯度儀,可使流動(dòng)相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變,包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值,或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質(zhì)(即使僅有一個(gè)基團的差別或是同分異構體)都能獲得有效分離。
        在分離原理,儀器構造及應用范圍上,比較氣相色譜及液相色譜有什么異同點(diǎn)。
        1、氣相:氣相色譜是一種物理的分離方法.利用被測物質(zhì)各組分在不同兩相間分配系數(溶解度)的微小差異,當兩相作相對運動(dòng)時(shí),這些物質(zhì)在兩相間進(jìn)行反復多次的分配,使原來(lái)只有微小的性質(zhì)差異產(chǎn)生很大的效果,而使不同組分得到分離。
        2、液相:高效液相色譜法是在經(jīng)典色譜法的基礎上,引用了氣相色譜的理論,在技術(shù)上,流動(dòng)相改為高壓輸送(最高輸送壓力可達4.9′107Pa);色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成,從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜(每米塔板數可達幾萬(wàn)或幾十萬(wàn));同時(shí)柱后連有高靈敏度的檢測器,可對流出物進(jìn)行連續檢測。
        流動(dòng)相貯存錯和梯度儀,可使流動(dòng)相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變,包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值,或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質(zhì)(即使僅有一個(gè)基團的差別或是同分異構體)都能獲得有效分離。
        分離系統該系統包括色譜柱、連接管和恒溫器等。色譜柱一般長(cháng)度為10~50cm(需要兩根連用時(shí),可在二者之間加一連接管),內徑為2~5mm,由"優(yōu)質(zhì)不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成,住內裝有直徑為5~10μm粒度的固定相(由基質(zhì)和固定液構成).固定相中的基質(zhì)是由機械強度高的樹(shù)脂或硅膠構成,它們都有惰性(如硅膠表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔徑可達1000?)和比表面積大的特點(diǎn),加之其表面經(jīng)過(guò)機械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣),或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因(如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長(cháng)度碳鏈的烷基等)或配體的有機化合物。
     
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